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Elisa實驗:加酶標抗體操作
更新時間:2025-08-13瀏覽:66次

  Elisa實驗:加酶標抗體操作

  以下是ELISA實驗中?加酶標抗體?操作的詳細步驟及注意事項,綜合整理自實驗指南:

  一、操作步驟

  抗體稀釋?

  使用封閉液(如5% BSA或脫脂奶粉)稀釋酶標抗體至工作濃度(通常1:1000~1:50000)。

  稀釋后需充分混勻,避免氣泡產(chǎn)生。

  加樣與孵育?

  每孔加入100 μL稀釋后的酶標抗體,避免觸碰孔壁或產(chǎn)生氣泡。

  37℃孵育30-60分鐘(時間根據(jù)說明書調(diào)整)。

  洗滌?

  棄去孔內(nèi)液體,用PBST(含0.05% Tween-20的PBS)洗滌3-5次,每次浸泡1-2分鐘并拍干。

  手工洗板時需垂直拍板,避免交叉污染。


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  二、關(guān)鍵注意事項

  抗體選擇?

  夾心法:需確保酶標抗體與包被抗體靶向抗原的不同表位,避免競爭結(jié)合。

  間接法:酶標二抗需與一抗種屬匹配(如兔抗鼠IgG-HRP)。

  質(zhì)量控制?

  設(shè)置空白對照(僅加稀釋液)和陰性對照(非特異性抗體),排除背景干擾。

  顯色后若整板OD值偏低,需檢查酶標抗體活性或稀釋比例。

  其他要點?

  酶標抗體需避光保存,現(xiàn)用現(xiàn)配。

  競爭法中,酶標抗原與待測抗原需同步加入。

  三、常見問題處理

  非特異性結(jié)合?:增加封閉時間(2小時以上)或更換封閉液(如5%脫脂奶粉)。

  復孔差異大?:檢查移液器校準及操作一致性。

  注:以上資料僅供參考,如需具體品牌說明可進一步提供貨號查詢詳細參數(shù)。

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