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瓊脂糖電泳常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案
更新時(shí)間:2025-06-10瀏覽:116次

  瓊脂糖電泳常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

  以下是瓊脂糖電泳常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案的總結(jié):

  一、?條帶異常問(wèn)題?

  條帶模糊/拖尾?

  原因?:DNA降解、緩沖液陳舊或上樣過(guò)量

  解決?:

  使用新鮮緩沖液(TAE/TBE),避免反復(fù)使用;

  減少上樣量(每孔≤10μL),避免超載;

  檢查核酸酶污染,確保樣品純度。

  條帶扭曲或"笑臉型"?

  原因?:電場(chǎng)不均、梳子拔出不當(dāng)或膠體凝固不均


  解決?:

  預(yù)電泳5分鐘(低電壓)平衡電場(chǎng);

  垂直緩慢拔梳子,避免孔變形。

  Marker條帶不清晰?

  原因?:膠濃度不合適或染料分布不均

  解決?:

  調(diào)整膠濃度(0.8%-2%按片段大小選擇);

  改用泡染法(如GelRed后染色)。

  二、?電泳過(guò)程問(wèn)題?

  DNA遷移異常?

  電壓過(guò)高?:>10V/cm易致條帶擴(kuò)散,建議5-8V/cm;

  緩沖液錯(cuò)誤?:避免用自來(lái)水或高濃度母液,需1×TAE/TBE。

  凝膠漂浮或緩沖液不流動(dòng)?

  原因?:冷卻泵故障或密封不良

  解決?:檢查設(shè)備密封性,調(diào)整蠕動(dòng)泵速度。

  三、?其他關(guān)鍵問(wèn)題?

  無(wú)條帶顯示?

  原因?:電極接觸不良、DNA未染色或樣品降解

  解決?:檢查電極連接,確認(rèn)染料活性。

  背景熒光高?

  原因?:膠體雜質(zhì)或紫外曝光過(guò)久

  解決?:過(guò)濾瓊脂糖溶液,縮短紫外觀察時(shí)間。

  拖尾現(xiàn)象?

  原因?:DNA結(jié)合蛋白或鹽分污染

  解決?:酚/氯仿純化樣品,乙醇沉淀去鹽。

  四、?預(yù)防性建議?

  制膠?:微波加熱瓊脂糖至透明,冷卻至60℃再加染料;

  維護(hù)?:每次使用后蒸餾水沖洗電極,避免鹽結(jié)晶腐蝕;

  保存?:Marker需-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。

  通過(guò)規(guī)范操作與針對(duì)性調(diào)整,可顯著提升電泳結(jié)果質(zhì)量。

  BS-300   基礎(chǔ)性電泳儀電源

  BS-600C  通用型電泳儀電源

  BS-mini01  垂直電泳槽(雙板)

  BS-mini04  垂直電泳槽(四板)

  BS-ZY03   轉(zhuǎn)印電泳槽(WB雙板和鉑樂(lè)通用)

  BS-ZY04   轉(zhuǎn)印電泳槽 (WB四板)

  BS-sub02  瓊脂糖電泳槽

  注:以上資料僅供參考,具體請(qǐng)咨詢(xún)技術(shù)老師。

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